Pemeriksaan Aglutinasi Lateks Rheumatoid Factor (RF)

Pendahuluan

Pemeriksaan aglutinasi lateks Rheumatoid Factor (RF) terbagi dua, uji kualitatif dan semi-kuantitatif untuk mendeteksi RF. Prinsip pemeriksaan RF sendiri adalah dimana gamma globulin manusia melapisi partikel lateks. Pencampuran partikel lateks dengan serum pasien yang mengandung RF menghasilkan aglutinasi visual. Tujuan pemeriksaan Aglutinasi Lateks RF sendiri digunakan untuk mendeteksi Rheumatoid arthritis pada pasien.

Rheumatoid arthritis (RA) adalah salah satu gangguan autoimun kronis yang paling banyak menyebar. Gangguan autoimun terjadi karena ketidakmampuan sistem kekebalan untuk membedakan antigen sendiri dan non antigen sendiri. Pada RA, sinovium, membran tipis, adalah beberapa sel tebal dan mengelilingi sendi dan selubung tendon, mengalami peradangan kronis karena infiltrasi kronis dari sel-sel inflamasi ke daerah tersebut. Sel yang terlibat dalam RA adalah sel T, khususnya Th17, makrofag, dan sel B. Sel B menghasilkan autoantibodi spesifik, yang memainkan peran penting dalam patogenesis penyakit. Misalnya, RF autoantibodi yang diproduksi oleh sel B selama RA dan dapat berinteraksi dengan Fc region dari antibodi IgG sendiri. Oleh karena itu, sistem kekebalan mulai menyerang antigen sendiri seperti persendian.

RF telah digunakan sebagai penanda biologis untuk RA. Namun, RF juga dapat dideteksi pada penyakit lain, dan pada orang sehat. Oleh karena itu, selalu disarankan untuk mengukur antibodi lain bersamaan dengan RF untuk meningkatkan akurasi diagnostik. Namun demikian, RF dapat digunakan untuk memantau pasien RA setelah didiagnosis, untuk membantu dalam terapi. Pemeriksaan aglutinasi RF juga tidak memberikan sensitivitas tinggi dan tidak membedakan berbagai kelas RF (IgA, IgG atau IgM), yang dapat dideteksi dengan ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay).

Prosedur

Siapakan alat bahan yang akan digunakan seperti Reagen dan Bahan yang Digunakan Reagen lateks: partikel lateks dilapisi dengan gamma globulin manusia. Kontrol positif: RF yang mengandung serum & kontrol negatif: serum hewan. Slide test untuk pengujian.

Langkah kerja Metode Kualitatif
Siapkan reagen, sampel serum, dan kontrol, jika dari penyimpanan almari pendingin harus dibiarkan sampai suhu kamar. Campur reagen lateks dengan hati-hati sebelum digunakan, tambahkan satu atau 20–50 μl (tergantung pada petunjuk pabrikan) ke lingkaran yang sesuai pada slide uji, jika resgen yang dipakai menggunakan tetesan, maka jangan sampai ujung pipet terekna cairan dalam slide. Tambahkan satu tetes atau seperti yang ditentukan oleh produsen ke setiap sampel yang akan diuji. Dengan menggunakan tongkat pencampur, campur serum dan reagen lateks secara merata di seluruh lingkaran. Segera nyalakan stopwatch, goyangkan slide dengan lembut ke depan dan ke belakang atau gunakan rotator pada suhu kamar selama dua menit kemudian amati adanya aglutinasi secara makroskopik.

Langkah kerja Metode Semi-Kuantitatif
Menggunakan saline, buat pengenceran serial sampel serum positif dalam metode kualitatif 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, dan seterusnya. Pipet setiap pengenceran sampel serum ke dalam lingkaran reaksi yang terpisah. Tambahkan satu tetes reagen lateks ke setiap tetes (tergantung pada petunjuk pabrikan) sampel serum yang diencerkan pada kaca objek. Jangan biarkan ujung penetes menyentuh cairan pada slide. Dengan menggunakan tongkat pencampur, campur sampel dan reagen lateks secara merata di seluruh lingkaran. Segera nyalakan stopwatch. Goyangkan slide dengan lembut, bolak-balik atau gunakan rotator pada suhu kamar selama dua menit kemudian amati adanya aglutinasi secara makroskopik.

Hasil Interpretasi
Metode Kualitatif RF yang mengandung serum pasien dan kontrol positif harus mengembangkan aglutinasi dengan partikel lateks. Di sisi lain, kontrol negatif dan serum tanpa RF tidak membentuk aglutinasi dengan partikel lateks.
Atau Aglutinasi adalah hasil tes positif dan menunjukkan adanya faktor rheumatoid pada benda uji. Tidak ada aglutinasi adalah hasil tes negatif dan menunjukkan tidak adanya faktor rheumatoid pada benda uji.

Metode Semi-Kuantitatif
Aglutinasi dalam pengenceran serum tertinggi sesuai dengan perkiraan jumlah faktor rheumatoid dalam IU/ml yang ada dalam spesimen uji.
Untuk menghitung RF dalam IU/ml, gunakan rumus berikut:
RF(IU/ml) = S x D
Dimana,
S = Sensitivitas reagen yaitu 10 IU/ml.
D = Pengenceran serum tertinggi yang menunjukkan aglutinasi.

Batasan Uji Aglutinasi Lateks RF
Tidak semua serum yang diperoleh dari pasien RA mengandung RF.
RF dapat dideteksi dengan penyakit dan infeksi lain seperti mononukleosis.

Ilustrasi

Pustaka

Pranab Dey, 2018, Basic and Advanced Laboratory Techniques in Histopathology and Cytology, Springer Nature Singapore Pte Ltd.
Insert Kit. Diakses 2021. Slide Test for Rheumatoid Factor, Gitanjali, Tulip Block, DR. Antonio Do Rego Bagh, Alto Santacruz, Bambolim Complex P.O., GOA-403202, India. Website: www.tulipgroup.com