Uji Simmon’s Citrate Pada Bakteri - Citrate Test

Berbagi
Print

Pendahuluan


Simmon's Citrate Agar digunakan untuk menguji kemampuan organisme dalam memanfaatkan sitrat sebagai sumber energi. Media mengandung sitrat sebagai sumber karbon dan garam amonium anorganik sebagai sumber nitrogen. Media ini mengandung natrium sitrat, amonium dihidrogen fosfat, berbagai nutrisi, dan indikator pH bromothymol blue. Penggunaan sitrat meningkatkan pH medium di atas 7,5 yang menyebabkan indikator bromothymol blue menjadi biru. Jadi, jika sitrat digunakan sebagai satu-satunya sumber karbon, media akan berubah menjadi biru. Jika media tetap hijau, organisme tersebut memiliki hasil sitrat negatif. Media ini direkomendasikan sebagai bagian dari pembeda antara spesies Enterobacteriaceae. Kecuali beberapa spesies, Salmonella, Edwardsiella, Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter, Serratia, dan Providencia biasanya memberikan reaksi positif, dan Escherichia, Shigella, Morganella, dan Yersinia bereaksi negatif. Proteus adalah bakteri yang memiliki hasil sitrat variabel (berubah-ubah/tidak selalu).

Prosedur


Siapkan media agar miring (Simmon's Citrate Agar) yang mengandung sitrat, garam amonium, buffer, dan bromothymol blue Media dapat disimpan pada suhu 2-8oC dan pH media sitrat akhir 6,8. Untuk alat siapkan loop atau ose atau tongkat inokulasi steril, bunsen dan inkubator pada suhu 35oC

Langkah kerja
  1. Dengan teknik aseptik, inokulasi media sitrat dengan kultur bakteri yang sedang tumbuh.
  2. Inkubasi agar miring secara aerobik pada suhu 35 hingga 37oC hingga 4 hari.
  3. Amati agar miring untuk perubahan warna. Jika miring tetap hijau, organisme sitrat negatif. Jika miring sekarang biru, organisme sitrat positif.

Pembacaan Hasil
  • Uji positif adalah pertumbuhan dengan perubahan warna dari hijau menjadi biru pekat di sepanjang kemiringan.
  • Tes negatif adalah tidak ada pertumbuhan dan tidak ada perubahan warna; miring tetap hijau.

    • Kekurangan
      • Pertumbuhan berlebih pada kemiringan tanpa perubahan warna yang menyertainya dapat menunjukkan tes positif. Namun, jika agar tidak membiru pada inkubasi lebih lanjut, pengujian harus diulang dengan inokulum yang lebih kecil.
      • Pengujian dengan hasil yang samar-samar harus diulang.
      • Tes membutuhkan lingkungan aerobik.
      • Jangan diinokulasi dari biakan kaldu, karena media akan terbawa.
      • Untuk menghindari reaksi positif palsu, gunakan inokulum ringan untuk mencegah terbawanya zat dari media sebelumnya.
      • Reaksi media ini saja tidak cukup untuk identifikasi sampai tingkat spesies.


Ilustrasi

Pustaka


  1. Amy L. Leber, 2016, Clinical Microbiology Procedures Handbook, 4th edition, American Society for Microbiology.
  2. Subhash Chandra Parija, 2012. Textbook of Microbiology and Immunology, Second Edition, Elsevier
  3. American Type Culture Collection (ATCC®), 2015, Introduction to Microbiology, 10801 University Blvd. Manassas, VA 20110

Tidak ada komentar:

Posting Komentar