Pengecatan PAS (Periodic Acid-Schiff) - Sum-sum Tulang

• Pendahuluan
• Prosedurr
• Ilustrasi
• Pustaka
• Lihat Semua

Pendahuluan

Pewarnaan Periodic Acid-Schiff (PAS) membantu dalam diagnosis beberapa leukemia limfositik akut dan beberapa subtipe leukemia mielogenus akut, dan juga dapat membantu dalam membedakan penyakit DiGuglielmo. Pewarnaan ini mengindikasikan keberadaan mucoprotein, glikoprotein, dan karbohidrat berbobot molekul tinggi. Pada sel darah, yang terutama tertanda positif adalah glikogen. Secara normal, hampir semua sel darah, kecuali eritroblas, menunjukkan pewarnaan positif. Intensitas pewarnaan dan pola pewarnaan akan bervariasi tergantung jenis selnya.

Pewarnaan dapat bersifat tersebar, granular, atau campuran dari keduanya. Granulosit secara normal menunjukkan pola pewarnaan tersebar, sedangkan pewarnaan limfosit bersifat granular. Granulosit menunjukkan reaksi positif pada semua tahap perkembangan, dengan neutrofil dewasa menunjukkan reaksi yang paling kuat. Myelosit dan myeloblas mengandung granula positif yang lebih sedikit. Granula eosinofil tidak mengambil pewarnaan, tetapi sitoplasma latar belakang mengambil pewarnaan positif. Limfosit mengandung beberapa granula yang tertanda positif, baik yang halus maupun kasar. Granula monosit menunjukkan jumlah pewarnaan positif yang kecil, dan sel darah merah berinti umumnya tidak menunjukkan granula yang tertanda positif. Trombosit akan tertanda dengan dalam. Dalam kondisi penyakit, reaksi pewarnaan PAS akan berbeda dari yang normal dan ini memiliki beberapa nilai diagnostik. Pada leukemia limfositik kronis, limfosarkoma, dan penyakit Hodgkin, limfosit mengandung jumlah granula yang tertanda positif lebih banyak. Pada eritroleukemia (penyakit DiGuglielmo) dan talasemia, sel darah merah berinti sering menunjukkan reaksi positif. Beberapa pewarnaan positif pada sel darah merah berinti juga telah ditemukan pada anemia defisiensi zat besi, beberapa anemia hemolitik, anemia pernisiosa, anemia aplastik, dan polisitemia.

Prosedur

Persiapan alat dan bahan

1. Fiksatif formalin alkohol.
   • Formaldehida 10,0 mL
   • Etanol 90,0 mL
   • Simpan dalam lemari pendingin.
2. Larutan asam periodic 1% w/v. Simpan dalam botol coklat dalam lemari pendingin. Stabil selama 3 hingga 4 bulan.
3. Reagen Schiff.
   • Fuchsine dasar 1,0 g
   • Air suling mendidih 400 mL
   • Biarkan larutan sebelumnya dingin hingga 50°C dan saring. Tambahkan 1,0 g thionyl klorida (SOCl2). Biarkan campuran tersebut berdiri dalam kegelapan selama 12 jam. Tambahkan 2,0 g arang aktif ke campuran tersebut, kocok selama 1 menit, saring, dan simpan dalam kegelapan pada suhu 0 hingga 4°C.
4. Hematoksin Mayer.
5. Wadah Coplin.
6. Media mounting Pro-texx (Baxter, American Scientific Products), atau yang setara.

Spesimen:
Sediaan darah kering udara atau sumsum tulang.

Prinsip: Karbohidrat yang ada dalam sel darah dioksidasi menjadi aldehida oleh asam periodic. Kemudian, reagen Schiff bereaksi dengan aldehida untuk membentuk endapan berwarna merah yang tidak larut (senyawa aldehida-fuksin-asam sulfit).

Prosedur atau langkah kerja

1. Fiksasi sediaan dalam wadah Coplin yang berisi formalin alkohol selama 10 menit.
2. Bilas sediaan dalam air mengalir selama 15 menit.
3. Letakkan sediaan dalam wadah Coplin yang berisi asam periodic 1% selama 20 menit.
4. Bilas sediaan dalam air mengalir selama 5 menit.
5. Tiriskan sediaan dan letakkan dalam wadah Coplin yang berisi reagen Schiff selama 30 menit.
6. Bilas sediaan dalam air mengalir dan kemudian bilas dalam air suling selama 5 menit.
7. Pewarnaan tambahan sediaan dalam wadah Coplin yang berisi hematoksin Mayer selama 5 menit.
8. Bilas sediaan dalam air mengalir selama 15 menit. Biarkan mengering udara dan pasang penutup kaca.
9. Periksa sediaan di bawah mikroskop, menggunakan objektif perendaman minyak (100X). Glikogen yang ada dalam sel akan mewarnai dengan warna merah ungu terang.

Catatan:
Sediaan darah atau sumsum tulang yang sudah diwarnai Wright dapat diwarnai dengan sukses sesuai dengan prosedur di atas. Sediaan yang sudah berumur beberapa tahun, baik yang sudah diwarnai Wright atau tidak, juga dapat diwarnai dengan pewarnaan PAS. Untuk memastikan reagen Schiff masih efektif, dapat diuji dengan menambahkan beberapa tetes reagen ke 10 mL formaldehida (37%). Campuran tersebut seharusnya berubah menjadi warna ungu muda. Jika tidak, ini mengindikasikan bahwa reagen Schiff tidak lagi baik dan harus dibuang. Reagen Schiff biasanya tidak berwarna. Jika menjadi merah muda, sebaiknya dibuang.

Ilustrasi

Pustaka

1. Barbara A. Brown, 1980, HEMATOLOGY: Principles and Procedures, Third Edition, by Lea & Febiger