Pemeriksaan Activated Partial Thromboplastin Time (APTT)

Activated Partial Thromboplastin Time (APTT) adalah salah satu tes koagulasi dasar yang paling sering dilakukan di laboratorium hematologi. Tes ini dikembangkan sebagai modifikasi dari Partial Thromboplastin Time (PTT) dengan penambahan aktivator kontak untuk menjamin aktivasi maksimal dari sistem kontak dan menghasilkan hasil yang lebih konsisten dan reprodusibel.

APTT merupakan tes skrining utama untuk mendeteksi kelainan pada jalur koagulasi intrinsik dan jalur umum. Tes ini sangat penting dalam diagnosis gangguan perdarahan bawaan seperti hemofilia A (defisiensi Faktor VIII) dan hemofilia B (defisiensi Faktor IX), pemantauan terapi heparin yang tidak terfraksi, dan deteksi inhibitor koagulasi seperti antikoagulan lupus.

Dalam praktik klinik, APTT sering digunakan bersama dengan PT untuk memberikan evaluasi menyeluruh tentang sistem koagulasi pasien. Kombinasi kedua tes ini dapat membantu dalam diagnosis diferensial berbagai gangguan hemostasis dan memandu manajemen terapi antikoagulan.

Prinsip

Activated Partial Thromboplastin Time (APTT) adalah uji dua tahap yang mengevaluasi integritas jalur intrinsik dan jalur umum koagulasi. Pada proses ini, kalsium dalam darah diikat oleh antikoagulan natrium sitrat untuk mencegah koagulasi. Plasma yang diperoleh setelah sentrifugasi mengandung semua faktor koagulasi intrinsik kecuali kalsium dan trombosit.

Pada tahap pertama, plasma sitrat dicampur dengan aktivator permukaan (seperti kaolin, silika, atau asam ellagic) dan fosfolipid (partial thromboplastin). Aktivator permukaan memulai fase kontak koagulasi dengan mengaktifkan Faktor XII dan prekallikrein, yang memulai kaskade koagulasi intrinsik. Fosfolipid berfungsi sebagai pengganti trombosit, menyediakan permukaan untuk interaksi faktor-faktor koagulasi.

Pada tahap kedua, kalsium klorida ditambahkan ke campuran yang telah diinkubasi, memicu langkah-langkah koagulasi yang bergantung pada kalsium. Setelah aktivasi Faktor XII, reaksi kaskade berlanjut melalui aktivasi Faktor XI, IX, dan VIII (jalur intrinsik), kemudian Faktor X, V, prothrombin, dan fibrinogen (jalur umum), yang akhirnya menghasilkan pembentukan bekuan fibrin. Waktu yang diperlukan untuk pembentukan bekuan ini diukur dalam detik dan dilaporkan sebagai APTT.

APTT secara khusus sensitif terhadap defisiensi faktor-faktor intrinsik (VIII, IX, XI, XII, prekallikrein, dan kininogen berat molekul tinggi) dan faktor-faktor jalur umum (X, V, II, dan fibrinogen).

Alat

1. Penangas air yang dipertahankan pada suhu 37 ± 1°C atau blok pemanas
2. Tabung reaksi plastik anti-basah atau tabung kaca yang disilikonisasi (13 × 100 mm)
3. Pipet plastik atau kaca yang disilikonisasi (0,1 mL, 0,2 mL, 1,0 mL)
4. Penganalisis koagulasi otomatis atau semi-otomatis (opsional)
5. Stopwatch atau timer elektronik dengan akurasi hingga 0,1 detik
6. Sistem pengiriman/pipet terkalibrasi
7. Mixer vortex
8. Sentrifugasi dengan kapasitas 1500-2500g
9. Perlengkapan venipuncture (tabung vakum berisi natrium sitrat 3,2%)
10. Rak tabung reaksi
11. Bak es untuk penyimpanan sampel

Reagen

1. Reagen APTT: Mengandung fosfolipid (partial thromboplastin) dan aktivator kontak (kaolin, silika, celite, atau asam ellagic). Tersedia secara komersial dalam bentuk liofilisasi atau cair. Simpan sesuai petunjuk produsen (biasanya 2-8°C).
2. Calcium chloride (0,025M): Untuk rekalsifikasi. Simpan pada suhu kamar atau didinginkan sesuai petunjuk produsen.
3. Plasma kontrol: Plasma kontrol normal dan abnormal dengan rentang APTT yang telah ditetapkan.
4. Type I reagent grade water: Untuk rekonstitusi reagen liofilisasi.
5. Antikoagulan natrium sitrat (0,109M, 3,2%): Untuk pengumpulan darah.

Prosedur

Pengumpulan dan Persiapan Spesimen:

1. Kumpulkan darah melalui venipuncture bersih ke dalam tabung vakum yang berisi natrium sitrat 3,2% (1 bagian sitrat hingga 9 bagian darah).
2. Segera campur darah dengan inversi lembut 4-5 kali.
3. Sentrifugasi pada 1500-2500g selama 10-15 menit untuk mendapatkan plasma miskin platelet.
4. Transfer plasma ke tabung plastik menggunakan pipet plastik.
5. Pengujian harus dilanjutkan dalam waktu 2 jam jika disimpan pada suhu kamar atau dalam waktu 4 jam jika didinginkan.

Prosedur Pengujian:

1. Rekonstitusi reagen APTT sesuai petunjuk produsen jika dalam bentuk liofilisasi.
2. Panaskan awal larutan kalsium klorida hingga 37°C selama minimal 10 menit.
3. Beri label tabung reaksi untuk sampel pasien dan kontrol.
4. Pipet 0,1 mL plasma pasien atau kontrol ke dalam tabung reaksi yang sesuai.
5. Tambahkan 0,1 mL reagen APTT ke setiap tabung yang berisi plasma.
6. Campur perlahan dan inkubasi pada 37°C selama tepat 3-5 menit (ikuti rekomendasi produsen untuk waktu aktivasi spesifik).
7. Setelah masa inkubasi, tambahkan 0,1 mL kalsium klorida yang telah dipanaskan (0,025M).
8. Mulai stopwatch segera setelah penambahan kalsium klorida.
9. Campur isi tabung dengan cepat tetapi lembut.
10. Amati pembentukan bekuan dengan perlahan-lahan memiringkan tabung setiap beberapa detik.
11. Hentikan timer pada tanda pertama pembentukan bekuan fibrin.
12. Catat waktu dalam detik.
13. Ulangi langkah 4-12 untuk setiap sampel dan kontrol.
14. Hitung rata-rata dari penentuan duplikat jika dilakukan.

Pelaporan Hasil:

• Laporkan hasil pasien dalam detik hingga 0,1 detik terdekat.
• Laporkan rentang referensi normal untuk laboratorium Anda.

Rentang Normal dan Interpretasi

Hasil APTT:

• Rentang normal: Biasanya 25-35 detik (bervariasi berdasarkan laboratorium, reagen, dan metodologi)
• APTT memanjang: >35-40 detik

Interpretasi:
APTT memanjang dapat mengindikasikan:

• Terapi heparin
• Hemofilia A (defisiensi Faktor VIII)
• Hemofilia B (defisiensi Faktor IX)
• Defisiensi Faktor XI atau XII
• Penyakit von Willebrand
• Antikoagulan lupus
• Koagulasi intravaskular diseminata (DIC)
• Penyakit hati
• Defisiensi vitamin K

Untuk pemantauan heparin, rentang terapeutik biasanya 1,5-2,5 kali rata-rata rentang normal, yang sesuai dengan sekitar 0,3-0,7 IU/mL heparin menurut pengujian anti-Xa.

Referensi

1. Clinical and Laboratory Standards Institute. (1996). One-Stage Prothrombin Time (PT) Test and Activated Partial Thromboplastin Time (APTT) Test; Approved Guideline. NCCLS document H47-A (Vol. 16, No. 3).
2. Barbara A. Brown, 1980, HEMATOLOGY: Principles and Procedures, Third Edition, by Lea & Febiger