Penanganan Agregasi Trombosit pada Spesimen Darah dengan Antikoagulan EDTA

Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) berfungsi sebagai antikoagulan utama untuk pemeriksaan hematologi, bekerja dengan cara mengikat ion kalsium yang penting dalam kaskade koagulasi. Meskipun penggunaannya sangat luas, spesimen yang menggunakan antikoagulan EDTA terkadang menunjukkan penggumpalan trombosit, yang dapat secara signifikan mempengaruhi hasil pemeriksaan darah lengkap otomatis (CBC). Fenomena ini dapat menyebabkan penurunan jumlah trombosit palsu, berpotensi memicu investigasi diagnostik atau intervensi terapeutik yang tidak perlu jika tidak diidentifikasi dan ditangani dengan tepat.

Fungsi Trombosit

Trombosit memainkan peran penting dalam hemostasis dengan membentuk sumbat trombosit di tempat cedera vaskular dan menyediakan dasar fosfolipid untuk deposisi fibrin. Reseptor glikoprotein pada permukaan trombosit memfasilitasi penerimaan sinyal eksternal dari sumber vaskular dan sirkulasi. Sinyal-sinyal ini ditransmisikan melalui membran trombosit ke "messenger sekunder" melalui jalur yang bergantung pada kalsium, baik melalui mobilisasi kalsium atau sekuestrasi. Mekanisme signaling yang bergantung pada kalsium ini menjadi relevan ketika mempertimbangkan mekanisme EDTA yang menginduksi agregasi trombosit pada spesimen tertentu.

Penggumpalan Trombosit

Penggumpalan trombosit dapat dicurigai ketika alat otomatis melaporkan jumlah trombosit di bawah kisaran referensi pada pasien tanpa indikasi klinis trombositopenia. Alat hematologi modern biasanya memberi tanda pada spesimen seperti ini, memperingatkan petugas laboratorium tentang potensi masalah agregasi. Bergantung pada teknologi spesifik yang digunakan, penggumpalan trombosit juga dapat mempengaruhi jumlah sel darah putih, jumlah sel darah merah, atau parameter sel darah merah seperti mean corpuscular volume (MCV) dan mean corpuscular hemoglobin concentration (MCHC). Pemeriksaan mikroskopis apusan darah yang diwarnai dengan pewarnaan Romanowsky tetap menjadi metode definitif untuk mengkonfirmasi agregasi trombosit.

https://www.horiba.com/int/healthcare/hematovision/platelets/anomalies/platelet-aggregate/

Mekanisme Penggumpalan Trombosit

Beberapa mekanisme berkontribusi pada agregasi trombosit dalam spesimen dengan antikoagulan EDTA:

Faktor Preanalitik

Penyebab yang paling umum melibatkan pencampuran spesimen yang tidak memadai segera setelah pengumpulan. Pedoman merekomendasikan membalikkan tabung EDTA delapan hingga sepuluh kali segera setelah pengambilan darah. Pencampuran yang tidak cukup mencegah distribusi antikoagulan yang tepat di seluruh spesimen, berpotensi menyebabkan pembekuan lokal dan agregasi trombosit.

Pengambilan darah vena traumatis merupakan faktor signifikan lainnya, karena kerusakan jaringan dapat mengaktifkan kaskade koagulasi dan mempromosikan agregasi trombosit sebelum antikoagulan dapat memberikan efeknya. Demikian pula, pengikisan kulit selama pengumpulan kapiler dapat mengaktifkan trombosit dan menginduksi penggumpalan.

Rasio darah-terhadap-aditif yang tidak tepat, akibat pengisian tabung pengumpulan yang kurang atau berlebihan, dapat mengganggu efek antikoagulan EDTA dan mempromosikan agregasi trombosit. Tabung pengumpulan harus diisi sesuai dengan volume yang dinyatakan untuk mempertahankan konsentrasi antikoagulan yang optimal.

Pseudotrombositopenia yang Diinduksi EDTA

Fenomena tersendiri yang dikenal sebagai pseudotrombositopenia yang diinduksi EDTA terjadi pada sekitar 0,1-0,2% dari populasi umum. Kondisi ini disebabkan oleh aglutinin trombosit yang bergantung pada EDTA atau autoantibodi yang ada dalam plasma pasien. Pengikatan kalsium yang diinduksi oleh EDTA tampaknya mengubah glikoprotein permukaan trombosit, menciptakan neoantigen yang dikenali oleh autoantibodi ini (terutama imunoglobulin IgG dan IgM), yang menyebabkan agregasi trombosit.

Pseudotrombositopenia yang diinduksi EDTA dapat termanifestasi pada individu yang sehat maupun pada pasien dengan berbagai kondisi, termasuk infeksi virus (HIV, CMV, rubella), gangguan autoimun, gangguan trombotik, dan mononukleosis infeksiosa. Dalam kasus terakhir, peningkatan level aglutinin dingin dapat berkontribusi pada agregasi trombosit.

Strategi Penanganan Laboratorium

Ketika dihadapkan dengan dugaan penggumpalan trombosit, profesional laboratorium dapat menerapkan beberapa pendekatan untuk mendapatkan hitungan trombosit yang akurat:

• Pemeriksaan mikroskopis apusan darah yang diwarnai merupakan langkah awal untuk mengkonfirmasi keberadaan agregat trombosit. Verifikasi visual ini membantu membedakan trombositopenia sejati dari hasil palsu akibat penggumpalan.
• Antikoagulan alternatif dapat mengatasi agregasi yang diinduksi EDTA. Mengumpulkan darah dalam tabung natrium sitrat sering mencegah penggumpalan trombosit, meskipun jumlah trombosit harus dikalikan dengan 1,1 untuk memperhitungkan efek pengenceran antikoagulan cair.
• Untuk kasus yang melibatkan aglutinin dingin, seperti pada mononukleosis infeksiosa, pemanasan tabung EDTA hingga 37°C sebelum pengumpulan dapat mencegah agregasi trombosit yang bergantung pada suhu.
• Gangguan mekanis dari agregat trombosit melalui vorteksing terkontrol terkadang dapat menghasilkan hitungan yang lebih akurat, meskipun agitasi berlebihan dapat menginduksi aktivasi trombosit dan harus dihindari.
• Pendekatan farmakologis telah menunjukkan harapan dalam kasus tertentu. Aminoglikosida seperti kanamisin telah dilaporkan secara efektif memisahkan gumpalan trombosit dalam pseudotrombositopenia yang diinduksi EDTA, meskipun intervensi ini tetap terutama bersifat investigasional.

Kesimpulan

Penggumpalan trombosit dalam spesimen dengan antikoagulan EDTA merupakan tantangan signifikan dalam pengujian hematologi. Memahami mekanisme yang mendasari fenomena ini dan menerapkan strategi penanganan yang tepat memungkinkan profesional laboratorium untuk memberikan jumlah trombosit yang akurat kepada klinisi, mencegah prosedur diagnostik dan intervensi yang tidak perlu. Teknik pengumpulan spesimen yang tepat, kepatuhan pada protokol pencampuran, dan pengenalan pseudotrombositopenia yang diinduksi EDTA tetap menjadi komponen penting dari praktik laboratorium yang berkualitas.

Referensi

1. Clinical and Laboratory Standards Institute. Tubes and Additives for Venous Blood Specimens Collection; Approved Standard – Fifth Edition, H01-A5, 2003.
2. Rodak B. Diagnostic Hematology. WB Saunders Co; 1996.
3. Clinical and Laboratory Standards Institute. Procedures for the Collection of Diagnostic Blood Specimens by Venipuncture; Approved Standard – Sixth Edition, H03-A6, 2007.
4. Clinical and Laboratory Standards Institute. Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens for Common Laboratory Tests; Approved Standard – Fourth Edition, H18-A4, 2009.
5. Kjeldsberg C, Hershgold E. Spurious Thrombocytopenia. JAMA. 1972;227(6).
6. Hagerman R. Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) – Dependent Pseudothrombocytopenia: A Case Report of an Incidental but Important Finding. www.priory.com/med/casepresentations.
7. Hsieh AT, Chao TY, Chen YC. Pseudothrombocytopenia Associated with Infectious Mononucleosis. Archives of Pathology and Lab Med. 2003;127(1):e17-e18.
8. Qureshi B. EDTA-Dependent Pseudothrombocytopenia. LabMed. 1998;29(8):471-473.
9. Gulati G, Asselta A, Chen C. Using a Vortex to Disaggregate Platelet Clumps. Lab Med. 1997;28(10):665-667.
10. Sakurai S, Shiojima I, Tanigawa T, et al. Aminoglycosides prevent and dissociate the aggregation of platelets in patients with EDTA-dependent pseudothrombocytopenia. Br J Haematology. 1997;99:817-23.